荣鼎牌二氧化氯消毒剂杀菌性能的试验观察
荣鼎牌二氧化氯消毒剂为一元包装的粉剂,用载体定量杀菌试验对其杀菌效果进行了试验观察。结果,二氧化氯含量为500mg/L和250mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液分别作用5min和20min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率均达99.90%,二氧化氯含量为375mg/L时,作用20min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率达100.00%。二氧化氯含量为400mg/L和300mg/L荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液分别作用3min和5min,对白色念珠菌的杀灭率达99.92%;二氧化氯含量为200mg/L和100mg/L时,分别作用3min和10min,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭率均达99.90%。二氧化氯含量为4000mg/L和3000mg/L时,分别作用10min和20min,可破坏不锈钢片上HBsAg的抗原性。有机物对其杀菌作用有一定影响。该粉剂存放于54℃14d,二氧化氯下降率为6.17%。用二氧化氯含量为200mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液擦拭消毒油漆物体表面,作用10min,对各油漆物体表面自然菌的消除率均≥90.50%;各物体表面自然菌残留菌数均≤8.8cfu/cm2。该粉剂存放于54℃14d,二氧化氯下降率为6.81%。
二氧化氯粉剂多为二元包装,一元包装报道极少。荣鼎牌二氧化氯消毒剂粉剂为一元包装,是由亚氯酸钠、三氯异氰尿酸加以稳定剂、活化剂配制而成,二氧化氯含为8.849%,使用前不需另加活化剂,在实验室对其杀灭微生物效果和储存稳定性进行了试验观察,现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 载体定量杀菌试验
1.1.1 试验菌片的制备
用含10g/L蛋白胨的0.03mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)将枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(ATCC10231)分别稀释制备成菌悬液,滴染于1.0cm×1.0cm无菌脱脂白平纹布片上,置37℃恒温箱中干燥20min,制成回收菌量为5×105cfu/片~5×106cfu/片的菌片。
1.1.2 中和剂鉴定试验
分别用枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、白色念珠菌(ATCC10231)进行试验,试验平行设8组(表1)。试验结果,第1组不长菌或长菌量远少于第2组,第2组菌数超过50cfu/片,第3、4、5组组间菌量相差低于10%,第6、7、8组不长菌,表明所用中和剂及其浓度适宜。
1.1.3 载体浸泡量杀菌试验
试验时,将荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶解5min,立即稀释成试验用消毒液,将菌片置于消毒液(1片菌片5ml消毒液,阳性对照组为PBS)中,作用至规定时间,取出菌片放入含有5ml中和剂的试管中,中和作用10min,将试管敲打80次,洗脱混匀。取洗脱液0.5ml作活菌计数,计算杀灭率。
1.2 HBsAg抗原性破坏试验
1.2.1 HBsAg样片的制备
用含5%小牛血清的PBS将纯化HBsAg稀释成100μg/ml(灵敏度为1ng/ml),取20μl HBsAg悬液滴染于直径为15mm不锈钢圆片。
1.2.2 中和剂鉴定试验
试验平行设8组(表4),当第1组S/N值<2.1或远小于第2组,第3、4、5组S/N值大于等于2.1且相近,当第6、7、8组S/N值均<2.1时,表明所选用的中和剂及其浓度适宜。
1.2.3 HBsAg抗原性破坏试验
采用载体密闭浸泡法。取HBsAg样片1片放入无菌试管中,染有HBsAg的一面朝上,注入1.0ml消毒剂溶液,置20℃~21℃水浴,作用至规定时间,再加入1.0ml中和剂溶液。中和作用10min,将试管振荡30s,以洗下金属片上的HBsAg。用ELISA法检测洗脱液中HBsAg。同时设中和产物加HBsAg为阳性对照,消毒剂加中和剂为阴性对照。以试验组OD值(S)与阴性对照OD值(N)的比值(S/N)<2.1为HBsAg抗原性被破坏。
1.3 有机物影响试验
于芽胞悬液中加入小牛血清,使小牛血清最终浓度为25%和50%。余同定量杀菌试验。
1.4 物体表面现场消毒试验
将荣鼎牌二氧化氯消毒剂加入5L脱氯自来水中,溶解5min,使二氧化氯含量为200mg/L,用该消毒液擦拭实验台面并作用至预定时间,于消毒前、后分别用无菌棉拭蘸中和剂(含0.5%硫代硫酸钠和0.3%吐温80的PBS)进行采样。将棉拭头剪入盛有5ml中和剂的试管中,洗脱棉拭上的细菌,作活菌计数,计算杀灭率。
1.5 稳定性试验
将3袋荣鼎牌二氧化氯消毒剂用双层塑料包装置54℃恒温箱中14d,于放置前、后分别用碘量法测定二氧化氯含量,计算下降率。
2 结果
2.1 定量杀菌试验
2.1.1 中和剂鉴定试验结果
试验结果表明,含0.3%硫代硫酸钠和0.3%吐温80的PBS可有效中和残留的二氧化氯对受试菌的杀灭作用,该中和剂及其中和产物对试验菌及培养基无影响。见表1。
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2.1.2 杀菌效果
载体定量杀菌试验表明,二氧化氯含量为400mg/L和300mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液分别作用3min和5min,对白色念珠菌的杀灭率达99.92%；二氧化氯含量为100mg/L时,分别作用5min和10min,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭率均达99.93%,二氧化氯含量为500mg/L和250mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液分别作用5min和20min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率均达99.94%,二氧化氯含量为375mg/L时,作用20min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率达100.00%。见表2,表3。（3个标）
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2.2 HBsAg抗原性破坏试验
2.2.1 中和剂鉴定试验结果
含20%小牛血清、4%硫代硫酸钠和0.3%吐温80的PBS可有效中和残留的二氧化氯对HB-sAg抗耗性的抑制作用。见表4。
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2.2.2 HBsAg抗原性破坏效果
二氧化氯含量为4000mg/L和3000mg/L时,分别作用10min和20min,对HBsAg抗原性的破坏作用各次试验S/N值均<2.1,可完全破坏HBsAg的抗原性。见表5。
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2.3 有机物对杀菌效果的影响
菌悬液中含50%小牛血清对二氧化氯含量为375mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液杀灭枯草杆菌黑色变种芽胞有轻度影响。菌悬液中含25%小牛血清对二氧化氯含量为375mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液杀灭枯草杆菌黑色变种芽胞无影响。见表6。
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2.4 对物体表面消毒效果
用二氧化氯含量为200mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液,擦拭消毒油漆物体表面,作用10min,对各油漆物体表面自然菌的消除率均≥90.50%;各物体表面自然菌残留菌数均≤8.8cfu/cm2。
2.5 稳定性试验
54℃恒温箱内(相对湿度>75%)保存14后,二氧化氯含量由8.949%下降至8.397%,下降率为617%,见表7。
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二氧化氯含量为500mg/L和250mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液分别作用5min和20min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率均达99.90%,二氧化氯含量为375mg/L时,作用20min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率达100.00%。二氧化氯含量为400mg/L和300mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液分别作用3min和5min,对白色念珠菌的杀灭率达99.92%;二氧化氯含量200mg/L和100mg/L时,分别作用3min和10min,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭率均达99.90%。二氧化氯含量为4000mg/L和3000mg/L时,分别作用10min和20min,可破坏不锈钢片上HBsAg的抗原性。用二氧化氯含量为200mg/L的荣鼎牌二氧化氯消毒剂溶液,擦拭消毒油漆物体表面,作用10min,对各油漆物体表面自然菌的消除率均≥90.50%。该药为一元包装,其稳定性与鲍立峰报道接近,比贾松树报道的二元包装粉剂稳定性差。
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